陈曦¹ , 高素萍^2* , 申萍¹ , 石丽莎¹ , 胡菊¹ , 刘瑛琦¹ , 蒋雨兰¹

1 四川农业大学风景园林学院, 成都, 611130; 2 四川农业大学, 园林研究所, 成都, 611130
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18 卷, 第 22 篇   
收稿日期: 2019年03月13日    接受日期: 2019年03月20日    发表日期: 2020年05月21日

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为建立适合蓝花丹的 ISSR-PCR 反应体系，本研究以蓝花丹为供试材料，结合 L₁₆(4⁵)正交试验和单因素试验设计对影响蓝花丹 ISSR-PCR 反应体系的 5 个因素(dNTPs, Mg²⁺, 模板, Taq 酶, 引物)进行优化，并在最优反应体系的基础之上进行了引物及其最佳退火温度的筛选。结果表明，5 个影响因素中，Mg2+ 对扩增反应的影响最大；不同退火温度对扩增效果具有显著的影响，但将退火温度设置为 55℃时，大部分的引物都能扩增出清晰的条带。最终建立的蓝花丹 ISSR-PCR 反应体系为：总体积 25 μL，其中含 Taq 酶 1 U，模板 DNA 100 ng，dNTPs 0.15 mmol/L，引物 0.4 μmol/L，Mg²⁺ 0.5 mmol/L，10×Buffer 2 μL。研究结果为蓝花丹及其近缘种的遗传多样性研究以及遗传图谱的构建提供分子标记水平上的依据。
 

蓝花丹(Plumbago auriculata)； ISSR-PCR；反应体系；正交试验；单因素试验